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五種液相色譜法在這了，學(xué)到就是賺到
點(diǎn)擊次數(shù)：2111 更新時(shí)間：2019-10-12
液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法。液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
A.液固色譜法
使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個(gè)吸附—解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10?m。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。
B.液液色譜法
液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。
正相色譜法———采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相)；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。
反相色譜法———一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、、四氫呋喃等與水互溶的溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用*為，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右。
C.離子交換色譜法
固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。
緩沖液常用作離子交換色譜的流動(dòng)相。被分離組分在離子交換柱中的保留時(shí)間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團(tuán)作用弱有關(guān)外，它還受流動(dòng)相的pH值和離子度影響。pH值改變化合物的解離程度，進(jìn)而影響其與固定相的作用，流動(dòng)相的鹽濃度大，則離子度高，不利于樣品的解離，導(dǎo)致樣品較快流出。
離子交換色譜法主要用于分析酸、氨基酸、多肽及核酸。
D.離子對(duì)色譜法
又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測(cè)組分離子與離子對(duì)試劑離子形成中性的離子對(duì)化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離改善。主要用于分析離子度大的酸堿物質(zhì)。分析堿性物質(zhì)常用的離子對(duì)試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也與多種堿性樣品形成很的離子對(duì)。
分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。
離子對(duì)色譜法常用短鏈反相色譜柱柱（即C8），流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10mmol/L的離子對(duì)試劑，在的pH值范圍內(nèi)進(jìn)行分離。被測(cè)組分保時(shí)間與離子對(duì)性質(zhì)、濃度、流動(dòng)相組成及其pH值、離子度有關(guān)。
E.排阻色譜法
固定相是有孔徑的多孔性填料，流動(dòng)相是以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物以進(jìn)入孔中，滯留時(shí)間長(zhǎng)；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動(dòng)相流出，它利用分子篩對(duì)分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。
